Термин"апоптоз", предложенный в 1972 г. английскими учеными J.F.R. Кеrr, А.Н. Wyllie и A.R. Currie, состоит из двух греческих слов и означает в буквальном смысле "отделение лепестков от цветов", а применимо к клетке - особый тип смерти путем разделения ее на части (" апоптозные тельца "), которые впоследствии фагоцитируются соседними клетками разного типа.

Термин "программированная клеточная смерть" отражает функциональное назначение этого процесса, представляющего естественную часть жизни многоклеточного организма, связанного с метаморфозом и развитием [ Hedgecock E.M., Salston J.E. 1983 , Oppenheim R.W. 1991 ].

В генетическом аппарате многоклеточных организмов - животных, растений и грибов заложена программа гибели клеток. Это специальная программа, которая при определенных обстоятельствах может привести клетку к гибели. При нормальном развитии эта программа направлена на удаление избыточно образовавшихся клеток -"безработных", а также клеток -"пенсионеров", переставших заниматься общественно полезным трудом. Другая важная функция клеточной гибели - удаление клеток -"инвалидов" и клеток- "диссидентов" с серьезными нарушениями структуры или функции генетического аппарата. В частности, апоптоз - один из основных механизмов самопрофилактики онкологических заболеваний [ Thompson ea 1995 ].

Апоптоз играет главную роль как в развитии так и в гомеостазе [ Steller ea 1997 ]. Клетки умирают от апоптоза в развивающемся эмбрионе в ходе морфогенеза или синантогенеза и во взрослых животных в ходе обновления тканей. Система программируемой клеточной смерти - существенный фактор иммунитета , поскольку гибель зараженной клетки может предотвратить распространение инфекции по организму. Формообразовательные процессы в онтогенезе, позитивная и негативная селекция Т- и В-лимфоцитов у животных, гипер-чувствительный ответ растений на вторжение патогена, осенний листопад - лишь несколько примеров программируемой клеточной смерти (апоптоза).

Определенные клетки организма обладают уникальными сенсорами, называемыми рецепторами смерти , расположенными на поверхности клеток. Рецепторы смерти детектируют присутствие межклеточных сигналов смерти и в ответ на это быстро запускают внутриклеточный механизм апоптоза.

Поскольку физиологическая роль апоптоза очень существенна, нарушения этого процесса могут быть весьма вредными. Так, несвоевременный апоптоз определенных мозговых нейронов оказывает влияние на образование нарушений, таких как болезни Альтцгеймера и Паркинсона , в то время как неспособность делящихся клеток перейти к апоптозу после случившихся существенных нарушений ДНК способствует развитию рака.

Другим механизмом, направленным на подавление апоптоза, является активация транскрипционного фактора NF-кВ . Известен целый ряд антиапоптозных белков, кодируемых генами, экспрессия которых возрастает под действием NF-кВ, что приводит к предотвращению гибели клетки [ O"Connor et al., 2000 ]. Таким образом, регуляция апоптоза представляет собой пример сбалансированного механизма с многократным дублированием противовесов, призванным обеспечить надежный контроль за реализацией столь важной для клетки программы и в то же время делающим ее очень зависимой от внешних и внутренних воздействий.

В развитии апоптоза выделяют 3 морфологичеси различимых стадии: сигнальную (индукторную), эффекторную и деградации (деструкции). Индукторами апоптоза могут быть как внешние (внеклеточные) факторы, так и внутриклеточные сигналы. Сигнал воспринимается рецептором и далее последовательно передается молекулам-посредникам (мессенджерам) различного порядка и достигает ядра, где происходит включение программы клеточного "самоубийства" путем активации летальных и/или репрессии антилетальных генов. В ядре регистрируются первые морфологические признаки апоптоза - конденсация хроматина с формированием его осмиофильных скоплений, прилежащих к ядерной мембране. Позже появляются инвагинации (вдавления) ядерной мембраны, и происходит фрагментация ядра. В основе деградации хроматина лежит ферментативное расщепление ДНК [ Arends ea 1990 , Wyllie ea 1980 ]. Сначала образуются фрагменты, включающие 700, 200-250, 50-70 тыс. пар оснований, затем - фрагменты, содержащие 30-50 тыс. пар оснований. После реализации этого этапа процесс становится необратимым. Затем наступает межнуклеосомная дезинтеграция ДНК, т.е. разрывы нитей ДНК, находящихся между нуклеосомами. При этом образуются фрагменты, кратные по величине 180-190 пар оснований, что соответствует протяженности нити ДНК в пределах одной нуклеосомы. Отделившиеся фрагменты ядра, ограниченные мембраной, называют апоптотическими тельцами. В цитоплазме происходит расширение эндоплазматического ретикулума, конденсация и сморщивание гранул. Важнейшим признаком апоптоза является снижение трансмембранного потенциала митохондрий и выход в цитоплазму различных апоптогенных факторов (цитохрома с; прокаспаз 2, 3, 9; апоптоз-индуцирующего фактора). Именно нарушению барьерной функции митохондриальных мембран отводят ключевую роль в развитии многих типов апоптоза. Клеточная мембрана утрачивает ворсинчатость и образует пузыревидные вздутия. Клетки округляются и отделяются от субстрата. На поверхности клетки экспрессируются различные молекулы, распознаваемые фагоцитами - фосфосерин, тромбоспондин, десиалированные мембранные гликоконъюгаты, в результате чего происходит поглощение тела клетки другими клетками и его деградация в окружении лизосом фагоцитарных клеток [

В развитии апоптоза можно выделить три фазы. Суть первой из них - рецепция сигнала и начальные этапы его передачи; эта фаза обратима. Вторая фаза - активация каспаз - является ключевым событием в развитии апоптоза; она приводит к необратимым последствиям. Третья фаза состоит в реализации гибели клетки, запрограммированной на предыдущем этапе. Проявления первой фазы развития апоптоза многообразны. Вторая и третья фазы протекают более стандартно. По современным представлениям пути и механизмы запуска апоптоза сводятся к двум механизмам - рецепторному и митохондриальному, которые схематически отображены на рисунке 51.

Наиболее детально изучен рецепторный механизм включения апоптоза . На поверхности клеток могут экспрессироваться специализированные Рц, передающие сигналы к развитию апоптоза. Их общее обозначение –Рц «смерти» (death receptors - DR). Эти Рц относятся к семейству Рц фактора некроза опухоли (TNF). От других Рц этой группы они отличаются наличием в цитоплазматической части специального домена «смерти» (death domain - DD), необходимого для включения внутриклеточного сигнала, приводящего к развитию апоптоза. К настоящему времени описано 6 DR–Рц. Среди них наиболее известен Fas–Рц (АРО–1, CD95). Его лигандом служит тримерная молекула, относящаяся к семейству TNF - Fas–лиганд (FasL, CD178) . Известны мембранная и растворимая формы FasL, из которых первая является значительно более эффективным индуктором апоптоза клеток фенотипа CD95, чем вторая. К DR-семейству относится такжеTNF–R1 - Рц TNF 1–го типа (p55, CD120A), тогда как Рц 2–го типа (р75, CD120B) лишен домена «смерти» и непосредственно не включает апоптогенные сигналы . Лигандом для TNF–R1 служат молекулы семейства TNF - TNF a и лимфотоксин a (TNF b). Рц DR3 передает сигналы от недостаточно охарактеризованной молекулы DR3L (APO3-L). DR4 и DR5 служат Рц для молекулы TRAIL. Этот тример, также относящийся к семейству TNF, связывается, кроме того, с Рц-ловушками DcR1 и DcR2, обусловливающими разрушение TRAIL. В связи с этим TRAIL не играет существенной роли в индукции апоптоза нормальных клеток, однако он индуцирует апоптоз опухолевых клеток, на которых Рц-ловушки отсутствуют или экспрессируются слабо . Природа лиганда DR6 пока не установлена.

Во всех случаях взаимодействие тримерных лигандов с Рц приводит к тримеризации последних, что является обязательным условием их функционирования в качестве передатчиков апоптотических сигналов. При этом домены смерти приобретают способность взаимодействовать с аналогичными доменами адаптерных белков FADD (Fas–associated death domain) и TRADD(TNF–receptor death domain). FADD узнает домены смерти в составе прокаспазы 8 и, взаимодействуя с ними, обусловливает активацию каспазы 8. Результат действия TRADD аналогичен, но он реализуется через посредство FADD. Формирующиеся в результате указанных взаимодействий молекулярные комплексы называют DISC (Death–inducing signaling complex). Рецепторный путь включения апоптоза не требует синтеза РНК и белка de novo . Поскольку апоптоз при этом запускается путём активного воздействия на клеточные Рц, он обозначается как активный апоптоз.

Другая группа механизмов включения апоптоза реализуется в условиях дефицита ростовых факторов, когда клетка как бы предоставляется сама себе (апоптоз «по умолчанию» - рис. 51) . Данную форму апоптоза называют ещё пассивным апоптозом. Механизм пассивного апоптоза используется при гибели клеток под действием стрессорных факторов (в том числе облучения), глюкокортикоидов и ряда токсических агентов, например цитостатиков, применяемых в онкологической практике. В этих случаях основой апоптоза служат процессы, запускаемые в митохондриях и сводящиеся к повышению проницаемости их мембраны для проапоптотических факторов.

Рис . 51 . Развитие апоптоза : показаны два механизма включения апоптоза - обусловленный повышением проницаемости митохондрий (апоптоз «по умолчанию») и рецепторный («активационный»). Оба механизма приводят к реализации апоптоза по единому зффекторному механизму. TRAIL - лиганд, индуцирующий связанный с фактором некроза опухоли апоптоз; FasL - лиганд для РцFas (от Fas ligand); TNFRI - Рц для фактора некроза опухоли I (от TNF receptor I); DR - Рц «смерти» (от - Death receptor); FADD - домен «смерти» Рц Fas (от Fas–associated death domain);TRADD - домен «смерти» Рц для фактора некроза опухоли (от TNF–receptor associated death domain). Около значков, символизирующих факторы, указано их название. Сплошные стрелки означают превращения, пунктирные - влияния, штриховые - перемещения факторов. Пояснения в тексте.

Многие клетки (возможно большинство из них) нуждаются в специальных сигналах для поддержания своей жизнеспособности. Источником таких сигналов выживания обычно служат цитокины и контактные взаимодействия с окружающими клетками. В отсутствие сигналов выживания в клетке нарушается функция митохондрий, в частности механизмы гликолиза и дефосфорилирования АТФ. Поскольку АДФ и продукт гликолиза пируват необходимы для нормального осуществления окислительного фосфорилирования, транспорта электронов и создания градиента протонов, эти процессы нарушаются, что приводит к повреждению мембраны митохондрий .

Параллельно срабатывает механизм, который реализуется белками - продуктами протоонкогенов семейства Вс1–2 . Эти белки делятся на несколько групп. Часть белков содержат 3–4 ВН–домена (ВН - от Bcl–2 homology) и разделяется на анти–апоптотические (Bcl–2, Bcl–X L , Mcl–1 и т.д.) и про-апоптотические (Вах, Bak, Bcl–X S и т.д.) факторы. Особую группу составляют «только-ВН3»-белки («ВН3-only» - Bad, Bid, Bik, Bim, Noxa, Вbс3 и т.д.), которые, в соответствии с названием содержат только один ВН–домен - ВН3, а в остальном отличаются от белков рассматриваемого семейства. Именно «только-ВН3»-белкам, прежде всего Bim, мобилизуемому из цитоскелета, отводят роль пусковых факторов апоптоза по умолчанию . Экспрессия или активация «только-ВН3»-белков происходит в условиях дефицита цитокинов и других факторов выживания, а также при активации белка p53, являющегося сенсором разрывов ДНК (в последнем случае активируются «только-ВН3»–факторы Noxa и Вbс3) . «Только-ВН3»-белки блокируют анти–апоптотические факторы типа Bcl–2, образуя с ними димеры, и способствуют проявлению активности проапоптотических факторов. Ключевым проявлением активности последних является формирование трансмембранных пор, которые образуются в результате олигомеризации Вах и Вак, в норме подавляемой антиапоптотическими факторами.

Через поры в мембране митохондрий в цитозоль выходят цитохром С и фактор APAF–1 (Apoptose protease activation factor 1). APAF–1 освобождается из мембраны митохондрий: фактор Bikвытесняет его из гетеродимера с факторами Вс1–2 или BCL–X L , В составе которого он удерживается в мембране. APAF–1 и цитохром С в присутствии АТФ образуют комплекс с неактивной каспазой - прокаспазой 9. Этот комплекс называют апоптосомой. В ней под влиянием APAF–1, распознающего гомологичный домен в прокаспазе, происходит активация каспазы 9 . В отличие от рецепторного механизма реализация митохондриального пути включения апоптоза требует экспрессии ряда генов и синтеза de novo РНК и белка.

До активации каспаз процесс развития апоптоза обратим. Блокада распространения апоптотического сигнала по раным путям происходит по-разному. Рецепторный механизм апоптоза может быть прерван благодаря активации группы факторов FLIP (FLICE-inhibitory protein; FLICE - старое название каспазы 8), которые содержат эффекторные домены смерти, свойственные каспазе 8, но лишены её каталитического центра. В результате они конкурентно блокируют действие этой каспазы . Митохондриальный механизм включения апоптоза блокируется упоминавшимися выше антиапоптотическими факторами семейства Вс1–2, прежде всего самим Вс1–2 и Bcl–X L . Эффект Вс1–2 связан главным образом с его способностью связывать «только-ВН3»–факторы и предотвращать их стимулирующее действие на формирование комплексов Bax-Bak. Bcl–2 способен также связываться непосредственно с Вах и Вак, а также с Apaf–1. Эти механизмы препятствуют формированию трансмембранных пор в митохондриях и/или формированию апоптосом. Необходимо упомянуть также о «сфингомиелиновом реостате» - механизме контроля баланса пролиферации и апоптоза, осуществляемого метаболитами сфингомиелина, среди которых роль проапоптотического фактора принадлежит церамиду.

Итак, оба пути включения апоптоза приводят к активации каспаз. Каспазы - это группа цистеиновых протеаз, которые расщепляют полипептидную связь после остатков аспарагиновой кислоты. Различие отдельных каспаз по специфичности сводится к распознаванию различных тетрапептидов, прилегающих к месту разрыва с NH 2 –конца . Рецепторный путь приводит к активации каспазы 8 (реже - каспаз 2 и 10), митохондриальный - к активации каспазы 9. Эти ферменты относятся к группе инициаторных каспаз. В неактивной форме (прокаспазы) они содержат наряду с двумя протеазными доменами два домена смерти (прокаспазы 8 и 10) для взаимодействия с FADD и другими адаптерными белками или домен, рекрутирующий прокаспазу в состав апоптосомы (прокаспазы 9 и 2). Их активация является следствием агрегации, возникающей вследствие взаимодействия с адаптерными белками (FADD, Apaf–1) и вызывающей аутокаталитическое отщепление длинного N–концевого участка. В процессе активации молекулы происходит реорганизация доменов и формирование активного гетеродимера (тетрамер p18/р11-р18/р11 в случае каспазы 8, тример - в случае каспазы 9). После активации инициаторных каспаз процесс апоптоза становится необратимым.

Инициаторные каспазы вызывают частичный протеолиз (отщепление короткого про–домена) и вследствие этого активацию исполнительных или эффекторных каспаз - 3, 6 и 7. Наиболее важной и универсальной по своему участию в осуществлении апоптоза является каспаза 3 . Активная каспаза 3 -это димер p17/р12. Исполнительные каспазы формируются также при действии гранзима В - сериновой протеазы, транспортируемой в клетки–мишени из киллерных лимфоцитов (Т и NK).

Мишенями исполнительных каспаз служат многочисленные белки, значительная часть которых локализуется в ядре . Расщепление молекул–мишеней определяет весь спектр проявлений апоптоза. Одна из главных мишеней каспазы 3 - эндонуклеаза CAD (Caspase–activated DNase) активируется в результате расщепления ингибиторного субкомпонента. Активированная CADосуществляет деградацию ДНК, действуя на доступные для нее участки молекулы, расположенные между нуклеосомами. Расщепление той же каспазой ядерных ферментов PARP(Poly-ADP-Ribose Polymerase), а также ДНК–зависимой протеинкиназы блокирует процесс репарации ДНК. Действие каспаз на фактор ретинобластомы (Rb) и d –изоформу протеинкиназы С определяет нарушение контроля клеточного цикла. Расщепление киназ МNK–1 и FAK приводит к изменениям, имеющим следствием ослабление адгезионной способности клетки, а расщепление гельсолина и киназы РАК определяет характерные изменения клеточной морфологии.

Уже упоминалось, что клетки, подвергающиеся апоптозу, быстро фагоцитируются. Этому способствует экспрессия на поверхности апоптотических клеток ряда молекул, распознаваемых фагоцитами и облегчающих процесс фагоцитоза . Так, при апоптозе нарушается асимметрия мембраны, и фосфатидилсерин, в норме локализующийся на внутренней поверхности мембраны, оказывается экспонированным на поверхности. Он распознаётся молекулой CD14 макрофага и, возможно, другими Рц. Свободные остатки Сахаров, формирующиеся вследствие десиалирования мембранных гликоконъюгатов, распознаются мембранными лектинами фагоцитов. Тромбоспондин, который также появляется на поверхности апоптотических клеток, узнается молекулами адгезии - интегрином a 2 b 2 и CD36, через которые сигналы передаются внутрь фагоцитирующей клетки и активируют её метаболизм. Лизосомальная ДНКаза II довершает деградацию ДНК апоптотической клетки уже внутри фагоцита. Благодаря быстрому фагоцитозу и отсутствию выхода внутриклеточного содержимого в межклеточное пространство, погибающая клетка не «загрязняет» его и не вовлекает в процесс гибели соседние клетки, что составляет важное отличие апоптоза от некроза.

В связи с интенсивным фагоцитозом апоптотических клеток их трудно определить in situ . Идентификация процесса апоптоза не ограничивается регистрацией морфологических изменений клеток (это - слишком субъективный показатель). Она основана на ряде особенностей процесса, о которых говорилось выше (рис. 52). Большая часть методов определения апоптоза основывается на выявлении деградации ДНК. Ещё недавно в качестве основного и самого надежного метода определения апоптоза клеток использовался электрофорез фрагментов ДНК, экстрагируемых из клетки: для апоптоза характерна «лесенка», то есть наличие фрагментов, по протяженности кратных длине ДНК в нуклеосоме, что при электрофорезе проявляется в виде дискретных фракций . Для выявления нерепарированных разрывов ДНК используют TUNEL–метод (TdT–mediated dUTR-biotin Nick End Labeling), основанный на катализируемом терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазой (TdT) подсоединении к свободному 3"–концу нити ДНК меченых нуклеотидов с последующим обнаружением меченых клеток иммуногистохимическими или цитофлуорометрическими методами . В качестве скрининг–метода используют цитофлуорометрическое выявление гиподиплоидных клеток (т.е. клеток, потерявших часть ДНК вследствие её деградации), с помощью окрашивания пропидия йодидом . Ещё один широко распространённый цитофлуорометрический метод определения апоптоза используется для обнаружения экспрессии клетками фосфатидилсерина, который способен связывать аннексии V, меченный флуорохромом . Комбинирование окрашивания аннексином и пропидия йодидом позволяет дифференцировать апоптотические и некротические клетки (только последние окрашиваются пропидием без предварительной фиксации).

Рис . 52 . Методы определения апоптоза . а - схемы электрофореграмм олигонуклеотидов, иллюстрирующие различные проявления деградации ДНК при апоптозе (слева - «лесенка», отражающая последствия межнуклеосомной деградации ДНК с формированием дискретных фракций) и некрозе (справа - сплошное пятно, отражающее неупорядоченную деградацию ДНК), б - гистограмма, полученная при цитофлуорометрическом анализе фиксированных клеток, окрашенных на ДНК пропидия йодидом. Основной пик соответствует диплоидным клеткам, пик справа - клеткам, находящимся в клеточном цикле, пик слева, отмеченный курсором М1 - гиподиплоидным клеткам, утратившим часть ДНК в результате апоптоза - 28,7% от общего числа, в - результаты цитофлуорометрического анализа нефиксированных клеток, окрашенных конъюгатом аннексина V с изотиоцианатом флуоресцеина (по оси абсцисс) и пропидия йодидом (по оси ординат). Жизнеспособные клетки присутствуют в левом нижнем квадранте. В правом нижнем квадранте содержатся клетки, подвергшиеся апоптозу (связывают аннексии V, но непроницаемы для пропидия йодида), в левом верхнем квадранте - клетки, подвергшиеся некрозу (непроницаемы для пропидия йодида, не связывают аннексии V), в правом верхнем квадранте - как полагают, клетки, подвергшиеся апоптозу, который перешел в некроз.

Показания: рак простаты, рак молочной железы, рак матки, рак ЖКТ, рак легких, рак кожи, базалиома, меланома, рак гортани. ротоглотки, носа, мозга, рак крови, лимфолейкоз, лейкоз… Реактив универсальный для большинства видов опухолей, а также предраковых состояний – таких как лейкоплакия, гиперплазия…

Что такое АПОПТОЗ

Это запуск механизма самоотмирания больных и мутировавших клеток. Так задумано природой, чтобы все клетки, у которых произошел сбой программы, должны элиминироваться, уничтожаться. В каждой здоровой клетке существует механизм естественного, физиологичного, абсолютно безвредного отмирания, в отличие от некроза – патологического отмирания. Однако этому правилу не подчиняются онкологические клетки. Они стали автономными и живут по своим примитивным программам прото-клеток.

Причины онкологического перерождения клеток – сбой механизма регулировки энергетики клетки .

Энергетика высших или мета-клеток отличается тем, что она всегда осуществляется за счет кислородного (аэробного) метаболизма, тогда как у прото-клеток этот метаболизм смещен в сторону анаэробного метаболизма, то есть гликолиза. Онкоклетки из-за сбоя механизма управления на «сенсорном дисплее» клетки не могут запустить работу своих энергетических станций – митохондрий, они отключаются. Онкоклетки имеют разрывы в своей электроцепи, и это приводит к падению напряжения, электропотенциала. Митохондрии, кроме своих основных функций, поддерживают высокий потенциал как на ретикулярной сети клетки, так и в пределах ядра клетки. Особенность высших мета-клеток –создавать и удерживать сверхвысокие потенциалы. Особенно важны эти потенциалы для хроматина высших клеток. Клетки могут состоять из протопрограмм – древних, примитивных и метапрограмм – высших, то есть присущих только высокоорганизованным клеткам. Высшие клетки – это сложные структуры, в которых присутствуют как прото-, так и метапрограммы. Именно у онкоклеток эти метапрограммы отключены. Электрозаряд в хроматине онкоклеток понижен и приводит к изменению электромагнитного поля в ядре: оно резко слабеет. Это в свою очередь приводит к чрезмерному натяжению хромосом, в итоге могут произойти разрывы, которые внешне напоминают мутации. Потеря э/м потенциала приводит к нарушению работы теломер и фермента теломеразы на концах хромосом. Это в свою очередь незамедлительно отключает программы экспрессии тех локусов генов, которые отвечают за активаюци или непрерывный рост или торможение роста клеток. У онкоклеток эти программы регулировки роста или промоуции полностью разблокированы, становятся неуправляемыми.

Блок метапрограмм регулируется активностью митохондрий и их энергетикой. Отключаются митохондрии – отключается и блок метапрограмм. В итоге клетка теряет свою специализацию и функциональную работоспособность. По сути это «зависание» программы, когда нет программ обратного вывода, а значит невозможно репарировать и самовосстановиться. Клетка остается существовать в зоне протопрограмм, становится неуправляемой и способной размножаться бесконтрольно. Без митохондрий она существует на бескислородной энергетике, то есть на гликолизе.

Причины почему организм не может бороться с онкоклетками

Основное отличие онкоклеток от здоровых – это гликолизная (безкислородная) их энергетика . По антигенным характеристикам такие онкоклетки полностью аналогичны здоровым, поэтому для иммунитета они совершенно невидимы, а вернее иммунитет расценивает их как свои, нормальные. Ведь это те же самые клетки, что и здоровые, только у них сломан механизм сохранения энергетики. Вернее, сломаны гомеостазные программы и механизмы, ответственные за вывод клеток из гликолизного типа энергетики обратно, в аэробную. В организме случается, что при какой-то запредельной нагрузке клетки какой-то ткани вынуждены переходить на гликолиз. Например, мышцы у спортсменов-марафонцев часто переходят на режим гликолиза – это нормально. Нагрузка закончилась – и тут же автоматически включаются механизмы по возвращению к требуемым нормо-константам гомеостаза, которые выводят клетки из этого запредельного режима работы. Точно такой же нагрузкой для ткани является затянувшийся воспалительный процесс при травме, например, кости с последующим продолжительным её раздражением. Кроме того, хроническое, то есть устойчивое воспаление могут вызывать ожоги или гормональные перегрузки ткани, а также многое другое. Во всех этих случаях ткани могут зайти в гликолиз. Это симптом перенапряжения для какой-то части клеток. Если одновременно к этому присоединяется слом операторной системы, ответственной за вывод клеток из гликолиза, и процесс затягивается, то клетки навсегда «застревают» в гликолизе. Это и является по сути состоянием хронического провоспаления, предрака, а затем и перерождения в рак.

При повреждении специфической системы регулировки на мембранах клеток процесс идет в сторону дегенеративного перерождения ткани и утраты ею специфических особенностей и функций. Но кроме специфической системы регулировки (ответсвенная за дифференциацию, специализацию) существует еще и неспецифическая система регулировки (ответсвенная за регулировку вида энергетики клетки: аэробную или анаэробную, то есть гликолиз). Если же процесс поворачивает в сторону повреждения неспецифических операторных систем регулировки, то это переходит в онкологическую трансформацию клеток. Онкоклетки, как и протоклетки существуют на гликолизных программах существования. Кроме перехода на гликолиз онкоклетки теряют весь свой электропотенциал, отключаются интегральные белки, происходит электроразрыв в ретикулярной сети и на мембранах клетки, падает напряженность электромагнитного поля на электромагнитном каркасе, а значит отключаются и интегративные механизмы электрорегулирвки, обеспечивающие высшие функции клетки. Тем самым клетка переходит на уровень протоклеток, то есть полной дезинтеграции высших функций.

Отношение иммунитета к онкоклеткам.

Как на онкологические, так и на дегенеративные клетки иммунитет не обращает внимания – они свои. Это объясняет, почему научное направление иммунотерапии онкологии неперспективно.
Иммунитет может «набрасываться» на клетки, которые проявляют признаки некроза или инфицированные, но на онкоклетки он нападает только когда они чрезмерно проявляют провоспаление. Но не все онкоклетки проявляют провоспаление. Часть из них находится в фазе покоя, типа стволовых. При этом даже если удастся искусственно навязать иммунный конфликт с онкоклетками, то это тоже не безобидный процесс и поведет к повышению уровня интоксикации, дермотоксикозам, увеличению некротических зон, но никак не может полностью уничтожить все онкоклетки. Также не безопасны, а по сути являются варварскими и все остальные официальные методы лечения.
Итак, возлагать надежды на иммунитет, иммунотерапию при онкологии не следует, он просто здесь недееспособен, также напрасно искать препараты для поднятия противоопухолевого иммунитета.

Апоптоз – второй эшелон защиты, но на внутриклеточном уровне

Однако существует и другой эшелон обороны – должны подключиться механизмы самозащиты клеток изнутри, т.е. апоптоз.

Каждая клетка способна анализировать, сравнивать свой обмен с нормой и при необходимости его корректировать. Если клетка не соответствует норме и не может себя откорректировать – она должна самоликвидироваться. Для этого в клетки включены специальные программы на самоликвидацию. Это основное правило и требование здорового организма как системы. Программы апоптоза расположены в кольцевом геноме митохондрий. Это не случайно. Митохондрии обеспечивают аэробизм. Здоровая клетка не может и не должна находиться долго вне аэробизма. Ведь аэробизм – это важнейшее условие существования высших или метаклеток. Вне аэробизма они теряют свою специализацию. Этого клетка не может допустить и ставит заградительный механизм в виде апоптоза. Особенность онкоклеток в том, что они программы апоптоза запустить не могут, ведь для этого они должны быть готовы воспринять такой сигнал, быть чувствительными к нему, то есть митохондрии должны быть в рабочем состоянии. Но в наборе рабочих программ онкоклеток в качестве прото-клеток нет программ на апоптоз. Вернее, все эти программы у онкоклеток имеются, но они «зависли». Это тот случай, когда высшая клетка не может сама себе помочь и включить апоптоз на устранение аберрантных клеток.

Механизмы апоптоза.

В клетке встроены механизмы анализа ситуации. Это так называемая система ГЛОНАСК (глобальная навигационная система клетки): самоориентации и саморегулировки как по электромагнитным параметрам, так и по химическим. Если клетка зашла в глубокий гликолиз, то должны запуститься механизмы на вывод ее из этого состояния. В случае если одновременно сломана операторная система и сопряженные с ней системы интегральных и информационных белков, обеспечивающих такой вывод, то такая система не может замкнуть свой контур из разорванных звеньев и удержать гомеостат, не может запустить механизмы апоптоза. Открыта дорога «процветанию» онкоклеток.

Симптоматика апоптоза и некроза.

В случае апоптоза происходит сморщивание и усыхание клеток. Не отмечается провоспалительный процесс. В случае некроза отмечается мощный провоспалительный процесс – набухание клеток и отекание ткани с последующей интоксикацией как локального типа, так и всего организма, когда страдают многие органы и ткани. Поэтому-то все современные методы медицины, которые приводят к некрозу опухоли, неприемлемы.

Апоптанты и апоптогены.

В первом случае апоптантами являются вещества, готовые произвести спуск механизма апоптоза. Во втором случае это вещества, способные запустить механизмы апоптоза. Апоптантами, например, являются вещества, участвующие в процессе метаморфоза, например, превращения головастика в лягушку или гусеницы в бабочку. Тот же процесс – линька кожного чехла у змей или отшелушивание кожи у человека при обгорании на солнце. Или осенний листопад – у растений он связан с предзимним нарастанием гормона этилена. Это механизм четкой регулировки, задуманный природой. Апоптогенами не всегда являются вещества, естественные для организма, они могут быть и искусственного происхождения и при своём воздействии даже оказывать определенную побочку на организм в целом. Например, есть ретиноиды, которые способны вызывать апоптоз в онкоклетках, но при этом оказывают и выраженное негативное влияние на печень.

Каротиноиды (ретиноиды) в качестве апоптантов.

Из биологии известно, что ряд ретиноидов (подобных витамину А) в качестве многочисленных представителей каротиноидов отвечают, как за механизмы дифференциации клеток, регулировки темпов роста клетки, так и за проявление избирательного апоптоза в онкоклетках. Доказано противоопухолевое действие каротиноида Ликопин при лечении рака простаты. Давно обсуждаются возможности широкого применения каротиноидов при гормонозависимых опухолях молочной железы и т.п. Но практическая сторона этого дела не получила развития из-за невыраженности процесса, противоречивости полученных научных данных и неясности механизмов процесса. Существуют цис- и транс-формы каротиноидов, которые оказывают противоположное действие.

В результате исследований среди многочисленной группы каротиноидов с разнонаправленным действием были выделены специализированные ретиноиды, способные в высшей степени эффективно включать механизмы апоптоза в онкоклетках. Такие исследования вызвали бум в фармацевтических компаниях. Известно, что в программу исследований на Западе вкладываются десятки миллиардов долларов. Фундаментальные результаты уже получены, осталось провести клинические испытания, чтобы выйти на рынок с запатентованными препаратами против онкологии. К сожалению, в России таких громадных вложений в эти испытания не вкладывалось и, следовательно, эти препараты к нам будут поступать из-за рубежа. Одно «но» – стоимость их, как ожидается, будет превышать 15 тысяч долларов на курс. Естественно, многим россиянам такое лечение будет недоступно.

Тем не менее, в России тоже проведены исследования и первичные испытания на мышах с привитыми опухолями, которые показывают максимально возможную эффективность и высшую перспективность в сравнении со всем тем, что известно на сегодняшний день в лечении онкологии.

Самое главное преимущество такого лечения – его практически полная безвредность, т.е. отсутствие побочки. Это и не удивительно, так как здесь запускаются те механизмы, которые естественны для здоровых клеток, но отключены в онкоклетках. Другими словами, этот способ возвращает онкоклеткам смертность, естественную для злоровых клеток. Апоптоз еще называют сухим стерильным некрозом. Но по сути это не некроз, а саморассасывание, лизис больных клеток. Апоптирующие клетки обычно отмирают изнутри, остается только их внешняя оболочка, которая затем легко и без лишней побочки удаляется иммунными клетками. А раз это так, то это прорыв.

Наружные опухоли – такие как базалиома или меланома – начинают засыхать, сморщиваться, отшелушиваться и постепенно, без гноя, исчезать. Внутренние опухоли лизируют, но без сильной интоксикации, которая сопровождает некрозы опухолей, и без провоспалительного процесса. Именно провоспалительный процесс разжигает пожар саморазгорающегося онкопроцесса: промоуцию, то есть бурный рост онкоклеток и их метастазирование.

Ретиноиды российского производства – необходимость срочного внедрения в практику

Практика показывает: чтобы внедрить новый препарат, нужны многие годы. Заинтересовать Минздрав России профинансировать исследования и довести их до завершающего этапа – выпуска препарата в ближайшее время представляется возможным. Для этого нужно грантовое финансирование. Поэтому необходима помощь инициативных групп, общественников-лобистов способных выйти на правительство, парламент, а также активное содействие пациентов-волонтеров.

Но больным, борющимся с онкологией уже сегодня, не дождаться этих препаратов. Поэтому, учитывая обширную имеющуюся на сегодняшний день теоретическую подоплеку и мощную научно-практическую доказательную базу, в том числе и отличные первичные положительные опыты на животных и достаточно глубокие исследования по ретиноидам за рубежом, в т. ч. на людях, предлагаю воспользоваться нашим препаратом – ретиноидом CD437. На сегодняшний день лучшим чем у него действием и максимально перспективным направлением нет ничего и близко. Дорогу надо уступать лучшему и безвредному.

Применение ретиноидов на примере меланомы

Показано, что препарат имеет сильное дозозависимое антипролиферативное действие на клетки меланомы с помощью индукции программированной клеточной смерти. Запрограммированной клеточной смерти предшествовала мощная активация АР-1 комплекса в клетках, подвергнутых воздействию CD437.

В пробирках на клетках человеческой меланомы (линии MeWo) он проявлял сильное рост-ингибирующее действие. Тот же эффект проявлялся на животных, напрмер, на мышах в модели ксенотрансплантата (пересадка чужеродного опухолевого трансплантанта).

Вывод отчета указывает, что CD437 является ретиноидом, который активирует фактор транскрипции АР-1, в конечном итоге приводит к запрограммированной клеточной гибели обработанных клеток меланомы человека в пробирке и в естественных условиях.

Необходимы дальнейшие исследования, чтобы оценить лечебное и физиологическое действие этого нового класса синтетических ретиноидов CD437, которые открывают новые перспективы в безвредном лечении меланомы.

Исследования по применению ретиноида CD437 на примерах различных типов раковых клеток

Статьи по результатам экспериментального применения его при различных типах опухолей имеются в интернете, в том числе при лечении простаты, рака легких, рака мочевого пузыря, рака печени, рака желудка, остеосаркомы, рака шейки матки, рака молочной железы, глиомы (рак мозга).

Исследования по применению ретиноида CD437 на примере культуры раковых клеток простаты

Инкубация клеточных линий рака простаты в культуре ткани показало заметное ингибирование пролиферации и появление в популяции клеток апоптирующих клеток. Вывод: CD437 представляет собой уникальный ретиноид, который индуцирует арест митозов (остановку делений) в s-фазе и апоптоз в андроген-зависимых и независимых человеческих раковых клеток простаты. Это указывает на высокую потенциальную роль CD437 в лечении человека от рака простаты.

Такие же исследования проведены и на многочисленных других группах опухолей, в том числе рак груди, рак легких, рак кишечника… Научная разрозненная литература по ним огромна. В связи с этим Гарбузов Г. А. готовит к изданию книгу: « », где обобщен и проанализирован весь этот мировой опыт.

Лечебное применение ретиноида CD437 на кожной опухоли базалиома.

Пример. Чудом можно назвать наблюдение за действием этого препарата при наружном применении в случае базалиомы. Опухоль находилась чуть ниже груди. Давность заболевания – 25 лет. Опухоль непрерывно росла. До начала применения ретиноида апробировалось множество препаратов, в том числе Курадерм, МЕЛКОДЕРМ и ГЛИЦИФОНОВАЯ мазь, мази из чистотела, а также множество других препаратов и методов. Все это вызывало лишь ожог ткани, сильные боли, частичный некроз опухоли. При выжигании ее на одном месте она постепенно «всплывала» из глубины на другом месте. Казалось, она неистребима. Все это вызывало страшные мучения. Развитие некротических последствий в опухоли после такого «лечения» приводило к дерматотоксикозам и аллергии, которые было крайне трудно устранить. Это ухудшало жизнь пациентке и изматывало её. После любого такого «лечения» с грубыми ожогами и образования тонкой поверхностной рубцовой ткани над областью болячки вскоре опухоль восстанавливалась вокруг ожога. Она «вылазила» из глубин. Место ожога постоянно изъязвлялось, сочились жидкость и гной. Никакие примочки не помогали. А опухоль тем временем продолжала расти.

1 апреля поменяли тактику лечения – применили наружно в виде компресса ретиноид СД437. Опухоль впервые за много лет перестала болеть и сочиться. Довольно быстро ушло нагноение, за две недели опухоль начала не только подсыхать, но и уменьшаться в размерах, сморщиваться, угасать. Явно запустился механизм апоптоза, а роль апоптанта сыграл ретиноид.

Предлагаемое вещество не является лекарством

Конечно, пациенты должны понимать, что на данном этапе им предлагают не готовый препарат, а химическую субстанцию, которая обладает известными физиологическими свойствами, способными вызвать апоптоз в больных клетках. Решение по применению такого вещества необходимо принимать самим больным. Важно то, что предлагаемое вещество абсолютно безвредно для организма, но делает то, что не способно делать ни одно лекарство.

Мне известна формула этого ретиноидного вещества. Поэтому принято решение заказать это вещество через одну из российских лабораторий. Соответствие требуемой химической формуле гарантировано и подтверждено аналитически.

Как заказать и цена

К сожалению, на сегодняшний день цена достаточно высокая. Одна ампула отпускается по 1000 руб. На первоначальный курс надо минимум 20 ампул – 20 тыс. рублей и почтовые 500 р.

Состав ампул

Каждая ампула является аликвотой, то есть разовой дозой препарата.

Действуют ли ретиноиды и другие индукторы апоптоза на здоровые ткани?

Ретиноиды воздействуют адресно (таргетно) – только на те группы клеток, на которые нацелены, то есть на клетки, которые готовы их воспринять, услышать. Следовательно, побочка, в том числе боли, интоксикации и воспаления исключены. Опасения, что будут рассасываться и некоторые здоровые ткани, тоже безосновательны.

Способы применения

При наружных опухолях – таких как рак кожи, включая и меланому, базалиому, язвящий открытый рак груди – применяют в виде компресса. В этом случае непосредственно над областью опухоли на кожу наносят 1 ампулу препарата, а сверху накрывают пленкой или вощеной бумагой, а затем закрепляют бинтом или пластырем. Применяют обычно по 1 ампуле на 1 болячку через 1 день. Продолжительность лечения составляет от 40 дней до 3 мес., после чего в течение 2–3 мес. следует проводить поддерживающую терапию 1–2 раза в неделю до полного излечения. Если площадь опухоли обширная или они разбросаны в разных местах по телу, то применяют 2 ампулы.

Особенности применения при закрытой онкологии молочной железы

Кроме наружного применения допустимо одновременно применять, как и при других типах опухолей, путём микроклизм ректально через анус или ингаляционно с помощью небулайзера для вдыхания. Применять внутрь через рот можно с применением их в виде капсул или рассасывать в виде шариков из гречневой муки под языком (сублингвально).

Курс – по 1 ампуле через день. Длительность 40 дней. Эффективность проявляется быстрее чем при любом другом методе – 2-3 месяца.

При онкологии рта, гортани, пищевода препарат надо удерживать под языком, желательно около 2 часов, затем не есть 2 часа.

При внутренних опухолях в легких и грудной клетке – препарат применяют в основном путем вдыхания, ингаляцию с помощью небулайзера.

При опухолях в брюшине принимают или ингаляционно, или через микроклизмы, или чередуют такое применение.

В лабораторных условиях его применяют в виде уколов в опухоль или вокруг, или вводят внутривенно – капельницами.

О безвредности лечения. При этом отмечается безвредность и отсутствие побочки при соблюдени указанных доз.

Признаки положительного действия

В первую очередь начинает уменьшаться вся побочка от опухоли: её гниение и воспаление, боли, отеки, закрывается открытая язва. Затем останавливается бурный рост опухоли, и она начинает нисходить апоптоидным путём.

Длительность лечения

Эффект начинает проявляться через 1-3 или более месяцев. Скорость рассасывания до полного исчезновения опухоли у разных типов опухолей может быть разная, иногда затягивается на месяцы. Но даже на стадии её еще не полного рассасывания она становится не такой агрессивной и опасной.

Ремитирующие антирецидивные поддержки. После достижения ремиссии в ряде случаев необходима будет поддерживающая ремитирующая, то есть антирецидивная терапия для предотвращения рецидива. Практика показывает, что, например, при лечении лейкоплакии и её излечении имеется высокая вероятность возврата болезни, рецидива через 3-4 месяца. Однако при ремитирующей поддержке до 9 месяцев белезнь уходила без возврата рецидива на 92% в течении 10 лет. Поэтому возможно даже после получения положительного эффекта продолжать поддерживающее лечение еще хотя бы 10-12 месяцев с регулярностью 1-2 раза в месяц.

Сдерживание побочной симптоматики болезни, в том числе и представляющей угрозу для жизни

В ряде случаев важнее срочно убрать не саму опухоль, а ее побочное действие. Важно то, что препарат сдерживая «функционирование» опухоли ограничивает в первую очередь её негативную «побочку», в том числе и интоксикацию от неё, и остановку метастазирования и, по крайней мере, остановку её роста, что начинает проявляться довольно быстро.

Особенно это важно для терминальной стадии прогрессии болезни, когда врачи полностью беспомощны, ситуация считается тупиковой, безвыходной. Здесь часто создаются ситуации, когда надо срочно остановить такие угрозы для жизни, являющиеся следствием и «побочным проявлением» прогрессии опухоли, как онкологические экссудативный плеврит, асцит, высокая температура, боли, интоксикация, резкий сбой формулы крови, гемолитическая анемия с последующей билирубинемией, кахексия, немощность, гиперкальциемия, то есть сверхвысокое повышение содержания кальция в крови, что само по себе может привести к угрозе впадения больного в летальную кому. Вся эта симптоматика может привести к мортальному исходу. Обычными средствами её просто не остановить. Вся симптоматика здесь вторична и является следствием «работы» опухоли». Остановить надо в первую очередь хотя бы эту «работу», пагубную активность жизнедеятельности опухоли.

Апоптанты могут хотя бы «оглушить» по началу опухоль, затормозить её активность. Это позволит получить запас времени, чтобы затем подавлять опухоль и заставлять её рассасываться. На это уже понадобится на много больше времени.

Итак, «побочка» от опухоли может быть на столько выраженная, что представляют б`ольшую угрозу для жизни пациента, чем сама по себе опухоль. В таких случаях само проявление побочки может быть не совместимо с жизнью, в этом случае важнее быстро прекратить её пагубное действие, хотя бы нейтрализовать, парализовать вредоносную активность опухоли или метастазов. Здесь на помощь тоже могут прийти апоптанты.

Способ хранения. В холодильнике.

Срок годности. 2 года.

Противоположно направленное взаимодействие провоспаления и дифференциации, а также обратное действие дифференциации на воспаление

Особенностью онкоклеток является чрезмерно высокий уровень провоспалительного статуса. Провоспаление – основа для генетической промоуции и стимулирования роста ткани, которая воспринимает воспаление как требование для регенерации. В физиологии известно, что хроническое воспаление может привести к перерождению регенерирующих клеток в новые, аберрантные типы. Понимание механизма данного явления, известного как метаплазия (предрак), может сориентирвать выбор более правильного пути разработки адресного (таргетного) метода лечения, то есть действующего именно прямо в цель. Часто на первом месте по значимости стоит проблема провопалительного онкологического процесса. Обнаружено, что хроническое воспаление может приводить вплоть до перепрограммирования типа клеток, например, клетки роговицы глаз могут превращаться в клетки кожи.

Исследование раскрывает важный механизм, с помощью которого хроническое воспаление индуцирует ненормальное поведение стволовых клеток. Это имеет отношение к различным заболеваниям, связанным с хроническим воспалением, включая рак. Но это механизм дегенеративного процесса ткани. Но существует и обратный механизм, противодействующий дегенерации и малигнизации (раковое перерождение) ткани – это механизмы дифференциации. Это означает, что ретиноид, который действует в повышении степени дифференциации, одновременно будет противодействовать и онкологическим провоспалительным процессам. Итак, дифференциация может преграждать путь к провоспалению. А как мы уже говорили, в ряде случаев опасность представляет не сама опухоль, а её побочка в виде провоспаления. Естественно ожидать, что препарат СД437, как индуктор дифференциации, одновременно будет активно противостоять и программам обеспечивающих механизмы онкологического провоспаления. Следовательно, даже если нам не удастся быстро вызвать рассасывание опухоли, тем не менее, нам удастся быстро устранить всю острую побочку, как следствие опухоли.

Способы повышения эффективности индукции апоптоза в онкоклетках

Темпы проявления апоптоза в опухолях во многих случаях желают быть лучшими. Особенно это важно для крупных, то есть с`олидного типа опухолей, например, как саркома.

Витамин Д – важнейший компонент усиливающий запуск апоптозных механизмов в опухоли

Витамин Д – важнейший ключ регулировки на клеточном уровне в т. ч. и противодействия образования опухолей.

Ранее его относили к категории витаминов, но в действительности выяснена его еще и другая универсальная более важная роль в качестве клеточного гормона (прогормона, гормона первого эшелона тканевой регуляции по специализации клеток и подготовке к действию другими гормонами). В этой роли несёт функцию гормона, поддерживающего дифференциацию клеток (дифферетант), особенно это выражено в системе клеток костной ткани.

Витамин Д оказывает мощное модулирующее действие на иммунную систему, а дефицит витамина Д может вызывать системный воспалительный ответ, который является основным компонетом предрасположенности к опухолям. Он действует как на нижнем этаже регулировки, то есть на клеточном уровне, а также на верхнем этаже регулировки, в т. ч. и на уровне эпифиза. Через него он влияет на серотониновый рычаг мелатонино-серотонинового маятника. А это в свою очередь определяет состояние всего гормонального фона, а значит и весь спектр гормональных сбоев, которые определяют ведомые эпифизом гипоталамус и гипофиз. На всех уровнях он стоит заслоном к проявлению провоспалительной предонкологии, гормональных перекосов, в т.ч. эндометриоза и других опухолеподобных перерождений, да и гормонозависимых опухолей. В дальнейшем он участвует в проявлении острых провоспалительных процессов, особенно на далеко зашедших этапах развития опухоли.

Итак, дефицит витамина Д участвует в системном воспалительном процессе, то есть на всех уровнях организма, в том числе и на клеточном. Следовательно, он противостоит воспалению, что особенно важно при онкологических ничем не сдерживаемых провоспалениях. Именно провоспалительный пожар опухоли и поддерживает непрерывную её промоуцию и рост.

Растет и самовосполяется, «самовоспламеняется» опухоль благодаря дефициту витамина Д. Он сдерживает пролиферативное состояние и индукцию роста. Даже если он не убьет опухоль, то хотя бы остановит её в росте.
Витамин Д также регулирует процесс апоптоза. В этом его нормальная физиологическая суть.

В теле человека ежедневно умирает 50-70 миллиардов клеток. Они в свою очередь должны быть поглощены макрофагами или клетками соседями. Самое главное, что при этом процесса воспаления не происходит, поскольку это естественный процесс и регулируется он системами апоптоза, в которых напрямую участвует и витамин Д. Воспаление характерно только для процессов с дегенеративным и онкологическим исходом. В случае разгорания онкологического процесса действие витамина Д становится слабее чем программы онкоклеток и ему надо мощно помогать, только тогда он запустит процесс апоптоза и в онкологических клетках.

Исходя из выше изложенного, следует ожидать, что витамин Д и каротиноиды союзники, будут усиливать действие друг друга?

Важнейшее свойство витамина Д - это способствовать поглощению кальция через кишечник в кровь и из неё в кости. Но, как известно, при опухоли на стадии прогрессии кальций наоборот вымывается из костей в кровь и приводит к гиперкальциемии. Значит действие витамина Д и жизнедеятельность опухоли противоположно направленные.

Итак, при опухолях кальция в крови избыток и подавать его туда дополнительно бессмысленно. Казалось бы, раз так, то надо просто повышать дозы витамина Д. Но при опухолях ему это не по силам, что-то ему мешает проявить свой эффект в полной мере, чего-то ему не хватает. Онкоклетки просто его не «слышат», они «глухие» к нему и продолжают в его присутствии вымывать кальций из разных тканей с помощью особых белковых веществ, которых они выделяют в избытке. Создается ситуация, когда решается вопрос кто кого сильнее.

Очевидно, сам по себе витамин Д не сможет «сбить» сверхвысокий уровень кальция. Природу опухоли ему не изменить, но несколько понизить её активность очевидно может. Возможности его при опухолях слабы. Восстановить программу ему не дано. При сломанных высших программах специализации прима-программой становится протопрограмма. Восстановить эти зависщие высшие метапрограммы ему удастся. На опухолевые клетки в качестве клеточного гормона он не проявит свои возможности через ядерные рецепторы, но в качестве витамина-фермента он будет вмешиваться в клеточный метаболизм и не выпускать кальций из клетки. При завышенных его дозах можно так сбалансировать его действие, что жизнедеятельность онкоклетки станет не совместима с жизнью, выйдет за параметры оптимального для неё существования. Ведь за кальцием в клетку потянется и кислород, а это не подходит для режима онкоклеток. Они становятся намного слабее, не устойчивыми и легче запускаются программы апоптоза с помощью ретиноидов.

В своей практике я видел случаи, когда применение ретиноидов тянет в сторону апоптоза, но не перетягивает в свою сторону. Опухоль «застывает» на месте на долго и не движется ни в сторону уменьшения, ни продолжает расти. Ретиноиды могут быть слабым рычагом. Их эффект надо усилить. Здесь на этом пути витмин Д мощный дополнительный рычаг, помощь им по смещению процесса с «мертвой точки».

Витамин Д и ретиноиды должны работать вместе, это рычаги одного механизмаМы ожидаем, что мощный союз предложенной комбинации веществ будет более эффективно выводить опухоль из равновесия – оптимального режима для её существования, ослабит её устойчивость и облегчит её «расстреливание» другими веществами.

Рекомендуемые дозы. Выдвинута концепция, что ежедневное добавление в диету 20 000 МЕ витамина D 3 может стать мощной и безопасной терапией для ограничения системного воспаления (провоспаления по нашей терминологии), а дозы 40 000 МЕ и более для торможения развития раковых опухолей. С учетом новых данных, что это не витамин, а прогормон, который способен сдерживать опухоль, считаю, что дозы должны быть превышены еще в 3-5 раз. Тем более что эти дозы еще безвредны для организма.

Лучшим поставщиком вит. Д – является морская жирная рыба: лосось, макрель, сардины.

Казалось бы, солнечного света хватает всегда, но у большинства людей и тем более онкобольных отмечается острый дефицит витамина Д. Витамин Д вырабатывается только при прямых солнечных лучах, то есть в обеденное время. Кожа тела при этом должна быть оголена хотя бы на половину. Норму витамина можно получить за 15 минут, но онкопациентам рекомендуется ежедневно быть на свету больше, вплоть до 3-4 часов в день. Избегать солнца нельзя. Только хроническое чрезмерное пребывание на солнце не показано онкобольным.

Витамин Д и каротиноиды – единая система поддержания клеток на высоком дифферециальном уровне

Очевидно витамин Д и каротиноиды (витамин А) не просто союзники, а рычаги одной системы регулировки на генном уровне противостояния высокоспециализированной клетки к факторам её воспаления, деспециализации, дегенеративного перерождения и онкологизации. Причем каждый из них специализируется на своей функции в клетке, обеспечивает свою сторону процесса. Витамин Д затягивает кальций в клетку и делает её более аэробно работающей, а каротиноиды отвечают за создание и сохранение специализированных структур и функций в клетке. Они два рычага одной маятниковой системы регулировки клетки: в одних случаях в первую очередь надо удерживать высокую аэробную энергетику клетки, а в другом надо поддреживать дифференциальные функции клетки. Один из этих факторов регулировки не может полноценно работать без достаточной мощи противоположного фактора. Возможно с этим связаны ограниченнные возможности воздействия на онкоклетки односторонним воздействием. Можно утверждать, что действие ретиноидов многократно усилится при одновременном воздействии на онкоклетки витам. Д. Каждый из них корректирует действие другого. Таким образом, эта пара лежит в основе универсального механизма удерживающего на плаву функции специализации и функциональной работоспособности клетки.

Способ применения янтарной кислоты

Имеются достаточно серьезные научные проработки по примению янтарной кислоты при опухолях. По сути это вещество является клеточным гормоном, стрелочником переводящим рельсы с одного пути энергетики на другой, повышающим уровень аэробной митохондриальной энергетики клетки, в том числе и в онкоклетках. А это именно то что нам надо. Именно это будет встречно содействовать действию ретиноидов и повышать их эффективность. Эта кислота повышает уровень катаболических процессов клетке, она поворачивает тип энергетики клетки с анаэробного, гликолизного на аэробный путь. Конечно, она не сможет полностью перевести онкоклетку с анаэробного пути на аэробный, так у онкоклетки нарушены механизмы саморегулировки такого перевода. Тем не менее, она будет постоянно выталкивать онкоклетку хотя бы на псевдоаэробизм, аэробоподобный путь энергетики. Это мешает нормальному функционированию онкоклетки, расшатывает её «подводный» безкислородный метаболизм, вызывает в ней избыточную и ненужную для онкоклетки оксигенацию, таким образом выводя её из привычного для неё спокойного «подводного» режима энергетики. Это начинает лихорадить такие клетки и выводить их из оптимального для них режима энергетики существвания. А это и есть то, что нам надо. Ведь ретиноиды тоже не могут перевести онкоклетку на восстановление нормальной дифференциации, поэтому они автоматически включают запуск программ в «расход» таких онкоклеток, то сть на самоуничтожение. Естественно, что сукцинат, то есть янтарная кислота (ЯК) полностью в унисон будет работать с ретиноидным апоптантом.

Клинические исследования по применению янтарки полностью подтверждают повышение эффективности лечения онкологии в сочетании с другими методами, а также значительного продлевания жизни онкобольных, вплоть до 10 лет.

Казалось бы, что раз ЯК способствует улучшению работы пораженных митохондрий, то не будет ли она при этом противодействовать действию ретиноида? Оказывется нет, так как восстановить работу онкоклеток и их митохондрий до уровня нормальных клеток невозможно, для этого надо было бы запустить соответсвующие программы. Поэтому ЯК будет содействовать, а не противодействовать действию ретиноидов.

Дозы применения ЯК. Поскольку она действует как клеточный гормон, то больших доз ее не требуется. Онкопациентам рекомендуется в день от 3 до 10 таблеток по 100 мг ЯК. Её применяют с соками после еды. В своей практике я рекомендую обычно применять ЯК в препарате «Энерговит», где она содержится в наборе с другими интермедиатными кислотами, как лимонная, аскорбиновая и др.

Возможности гормона МЕЛАТОНИНА в повышении эффективности противоопухолевого лечения

Методы повышения естественного уровня мелатонина в организме. Оказывается, мелатонин является вторым по значимости веществом участвующим в программах регулировки апоптоза и дифференцировки клеток. Только действует он с уровня регулировки квазисистемы, то есть высшего уровня регулировки. Это система над всеми системами. Это система интеграции и синхронизации процессов на всех уровнях, в том числе и внутриклеточном. Также, как и ретиноиды он обладает однонапраленным действует и на уровне ядерных рецепторов клетки. При его рекомендации в комплексном лечении необходимо учитывать причины почему ретиноиды не обладают универсальным апоптозным действием на все типы опухолей. Ведь различие действия ретиноидов на различные типы опухолей заметная. Дело в том, что действие мелатонина на ядерные рецепторы является прима-программой, то есть главенствующей. Мелатонин открывает дорогу программам более высокого уровня, от него в большей степени зависит пройдет ли программа на апоптоз или дифференцивцию. Без такого высокого уровня мелатонина все механизмы по регенерации, метаморфозу, репарации, апоптозу практически закрыты или ограничены. Это обусловлено требованиями механизмов феноптоза, то есть запрограммированная смерть организма. Это лидирующая программа, выводящая на мортальный рубеж больные и стареющие организмы. Требуемый эффект практически может не проявиться. Он перекрыт другими программами. Это объясняет почему при применении ретиноидов необходимо одновременно и применение мелатонина. Одна программа пропускает действие другой.

Известно, что мелатонин сам по себе является фактором апоптоза опухолей и снимает провоспалительный процесс, что ограничивает промоуцию опухоли и ее метастазирование. Но и он не универсален. А в зрелом и старом организме его попросту не хватает. Он всего лишь открывает двери для других более специализированных для этого веществ, он подготавливает почву для них. Другие вещества, которые тоже направлены на специализацию данной конкретной ткани тоже не могут проявить свою высшую миссию по апоптозу без присутсвия мелатонина. Во всех типах опухолей универсальным компонентом для них будет применение и мелатонина. Это базисное средство.

Мелатонин помогает снизить онкологические боли, понижает уровень усталости и слабости. Доказано его содействие в лечении при раке яичников, матки, раке кожи, лейкемии, карциноме легких, мочевого пузыря, толстого кишечника. Мелатонин завязан на процесс, который вызывает гибель раковых клеток, то есть «апоптоз». Возможно это связано с выводом онкоклеток из глубокого гликолиза. Апоптоз запускается только в аэробных условиях, то есть на энергетике кислородного типа.

Одновременно существуют методики повышающие естественным путем выработки мелатонина в организме. Об этом в моей книге.

Исследования показали, что мелатонин оказывает избирательное угнетающее влияние на размножение раковых клеток и тормозит их митотическое деление в условиях как организма в целом, так и в пробирках. Полученные клинические данные подтверждают, что мелатонин действительно оказывает выраженный цитостатический эффект в отношении целого ряда раковых заболеваний таких, как злокачественная меланома или солидные раки.

Применение 10 мг мелатонина приводит к заметному увеличению выживаемости больных метастатическим раком легких.

У больных с раком легких, мозга, меланомой и глиобластомой добавление мелатонина содействовало увеличению продолжительности жизни.

Проверка мелатонина на различные типы опухолей показала наиболее выраженный эффект для некоторых форм гормонозависимых опухолей груди. При других типах опухолей этот эффект значительно ниже и варьирует. Мелатонин не является облигатным (обязательным, прямого действия) фактором апоптоза, а только лишь содействующим ему. Мелатонин снижает степень агрессивности опухоли. Он же ограничивает рост новых кровеносных сосудов опухоли (ангиогенез). Также он активирует систему цитокиновых веществ, которые помогают подавлять рост опухоли и стимулируют цитотоксическую активность макрофагов и моноцитов.

Таким образом мелатонин однозначно будет синергистом действию ретиноидов.

Где заказать мелатонин. Под названием «МЕЛАКСЕН» или другие его можно купить в аптеке.

Таким образом, Ретиноид СД437, мелатонин, янтарная кислота – действуют на генетическом уровне и только на онкоклетки и в одном направлении, противодействуя существованию раковых клеток. Вместе они сила.

Роль омега-3. Кроме того, значительную помощь в лечении окажет и полиненасыщенная жирная кислота Омега-3. Больше всего её в льняном масле, но льняное масло плохо усваивается, и большая часть его проходит мимо кишечника. Нами предложено заменить его на Урбеч «Льняной» - паста из необжаренных семян. Она имеет ограмные преимущества перед маслом. Основное её назначение – это снять онкологический провоспалительный процесс, который и поддерживает непрерывно тлеющий онкологический пожар. Эта омега-3 участвует в восстановлении мембран онкоклеток. У здоровых клеток в мембране её до 60% и такая мембрана является сенсорным дисплеем или операторной структурой обеспечивающей функции специализации клетки. У онкоклеток Омега-3 в мембране крайне не хватает, а также отсутствуют цилии, то есть структуры без которых эта клетка «глухая» к регулирующим сигналам. В случае репарирования мембран клетка становится способной реагировать и становится менее автономной и значит легче будет поддаваться воздействию на апоптоз.

Национальный институт рака в Аме­рике в своих предварительных результатах исследо­ваний тоже показал, что льняное масло проявляет выраженные противораковые свойства. Причем важные свойства ему придают лигнановые вещества, которых здесь изобилие. Опу­холи в области гинекологии, а у мужчин аденома и рак простаты относят к гормонозависимым опухолям. Именно здесь лигнаны помогают сдерживать рост гормонозависимых опухолей.

Способ применения: Ежедневно в течение года принимайте по 2-3 стол ложки 3 раза в день (если помогает заметно снимать боли или воспаления, то дозы увеличивать до приемлемой).

(бывший Тодикларк) 2 бут. по 800 р. = 1600 руб.

Экстракт Черного Ореха на медицинском керосине усиленный Осиной и Тополем бальзамическим. Для аппликаций и приёма вовнутрь. Обладает усиленным противовоспалительными, противоопухолевыми и гомеостаз регулирующим свойствами. Экстракт Гарбузова борется не с симптоматикой, а с более глубинными процессами её вызывающих.

Наружное использование: в виде компрессов или аппликаций над областью опухоли, лимфоузлов, метастазов.

Клинические испытания. Аналог этого препарата на керосине изучал академик А.Г. Маленков. Официальные клинические испытания показали положительную результативность в онкологии.

Эффективность. Метод позволяет добиться регрессии опухоли, т.е. повернуть процесс вспять, или остановить её процесс в 70-90% случаев у тех людей, которые не проходили химиотерапию и тем самым не ослабили ею дополнительно свою иммунную систему. Результативность напрямую зависит от места локализации опухоли. Лучше всего поддаются лечению рак молочной, щитовидной, предстательной желез, рак легких, мочевого пузыря и почек. При раке желудка и других органов брюшной полости результативность выздоровления - около 40%.

КОМПЛЕКСНАЯ ПРОГРАММА ПРИМЕНЕНИЯ ВЕЩЕСТВ:

• Ретиноиды (Выбирайте нужные )
• Витамин Д
• Янтарная кислота
• Мелатонин

Об отчетах и корректировках лечения

Через месяц-два рекомендуется выслать мне отчет о динамике заболевания после применения препаратов. Возможно, потребуется усиливать воздействие путем приема ретиноида внутрь, но не перорально (через рот), а с помощью свечей (ректально). Это необходимо, чтобы действующее вещество попало в кровь минуя ЖКТ.

Факторы, которые индуцируют апоптоз. Апоптоз контролируется системой соответствующих сигналов от внутренних (эндогенных) и внешних (экзогенных) факторов, которые воспринимаются через так называемые

рецепторы «смерти». Сигналы, которые могут приводить к развитию апоптоза, называют апоптогеннимы, или проапоптичнимы, стимулами.

Важнейшими эндогенными стимулами, запускающие апоптоз, является неправильный ход клеточного цикла, наличие вирусного поражения, наличие в клетке фрагментов поврежденной ДНК, «излишек» митогеном факторов.

Экзогенные стимулы, приводящие к апоптозу, представляют собой различные сигналы, поступающие к рецепторам клеток, например сигнал от рецепторов ФНО-семьи (Fas-, ФНО-рецептора и т.п.). Одним из важных механизмов контроля за ростом клеточных популяций зависимость клеток от сигналов, поступающих из клеточного микроокружения. Клетки, которые не получают этих сигналов, например в случае, если они попали в другой микроокружения, погибают щлях апоптоза. Поэтому к апоптозу могут приводить определенные митогенного стимулы, если они действуют в избыточном количестве или клетка не готова к их восприятию. С другой стороны, отсутствие нужных ростовых факторов также приводит к апоптотической гибели активированной клетки. Среди внешних факторов, которые могут приводить к апоптозу, следует также назвать ряд повреждающих воздействий, таких как токсины, радиация, УФ-облучение, воздействие сублетальных температур, механические повреждения. В случае сильно выраженного влияния эти факторы вызывают некроз тканей, при слабом - апоптоз отдельных клеток. Рецепторы «смерти» и их лиганды. Рецепторы «смерти», взаимодействие которых с соответствующими лигандами приводит к запуску апоптоза, являются членами суперродины рецепторов фактора некроза опухолей ФНПР. Важнейшим и поэтому хорошо изученным рецептором «смерти» является Fas (CD95/APO-1). К рецепторам семьи ФНО-Р кроме Fas относятся собственно рецепторы к фактору зу опухолей ФНО-Р1 и ФНО-Р2, а также многие другие молекул: CD30, CD40, фактор к фактору роста нервов ФРГ-Р т.д.. Рецепторы «смерти» характеризуются наличием 60 - 80-го аминокислотного цитоплазматического домена, который называют доменом «смерти» (DD - от англ. Death domein). Для эффективного инициирования сигнала «смерти» от мембраны клетки нужна тримеризация рецепторов, что и происходит при связывании рецепторов с соответствующими лигандами или агонистического антителами. После связывания рецептора домены «смерти» ассоциируются с определенными адапторной молекулами и таким образом инициируется сигнал к запуску программы апоптоза.

Оказалось, что к физиологическим лигандом к рецептору Fas является белок Fas-лиганд (FasL), который экспрессируется на поверхности клеток с цитотоксической функцией. Некоторые клетки могут экспрессировать как рецептор Fas, так и Fas-лиганд и таким образом самоуничтожаться.

Мембранная форма белка Fas представлена почти на всех клетках организма, которые способны к делению. Это позволяет клеткам иммунной системы индуцировать в случае необходимости апоптоз в своих «мишеней». Особенно плотно молекула Fas экспрессированных на клетках в кишечнике, тимусе, печени, легких и т.д.. Основное назначение мембранного Fas - это запуск программы апоптоза с клеточной поверхности. Однако в последнее время появились данные о некоторые другие функции Fas. В частности, было показано, что связывание Fas на мембране полиморфноядерных нейтрофилов приводит к хемотаксиса этих клеток. Более того, в некоторых случаях Fas может выступать как рецептор к ростовых факторов. Гликопротеин Fas может существовать как в ассоциированной с мембраной (mFas), так и в растворимой (sFas) формах. Растворимый форма Fas образуется путем альтернативного сплайсинга и может существовать в виде нескольких изоформ. Растворимый форма рецептора взаимодействует с Fas-лигандом на поверхности цитотоксических клеток и таким образом нейтрализует последние. Считают, что в некоторых случаях с помощью секреции растворимой формы Fas-рецептора опухолевые клетки избегают иммунного контроля.

Физиологический лиганд к рецептору Fas (FasL, CD95L) является трансмембранным белком с молекулярной массой 40 кДа, который экспрессируется в виде тройного. FasL является членом семьи цитокинов, включая фактор некроза опухолей а (ФНО-а), лимфотоксины а и ß, CD30L, CD40L и многие другие. FasL экспрессируется на активированных цитотоксических Т-лимфоцитах и естественных киллеров, а также на клетках кишечника, глаза, легких, почек, нервной ткани, плаценты. FasL по Fas, может существовать в связанной с мембраной и растворимой форме (sFasL и mFasL). Показано, что растворимый FasL имеет молекулярную массу 27 кД, существует в виде тройного, образующийся из мембранной формы в результате отщепления трансмембранного части определенной протеиназой. Растворимый форма FasL биологически активная, то есть способна индуцировать апоптоз в чувствительных клетках, экспрессирующих рецептор Fas. Реализация апоптоза. Главным «участником» процесса апоптоза является семье 14 цистеиновых протеиназ, которые расщепляют белки по пептидными связями после аспарагиновой кислоты и которые называют каспаза

Каспазы гомологичные между собой аминокислотными последовательностями и структурой. Они экспрессируются как проферменте и содержат следующие структурные элементы: N-концевой вариабельный домен, большую (20 кД) и малую (l0 кД) субъединицы. Активация каспаз происходит вследствие протеолитического расщепления связи между доменами и ассоциации большой и малой субъединиц с образованием гетеродимеру. Гетеродимеры, в свою очередь, ассоциируются и образуют тетрамер с двумя каталитическими центрами, работающими независимо.

Апоптичнои сигнал с поверхности клетки приводит активацию инициаторных каспаз, которые расщепляют и активируют эффекторные каспазы. Последние, в свою очередь, расщепляют внутриклеточные белки, что и приводит к развитию апоптоза. К инициаторных каспаз относят каспазы 8, 9, 10, а к эффекторных - 2, 3, 6, 7. Активация инициаторных каспаз требует связывания со специфическими кофакторами и адапторной молекулами.Наприклад, активация прокаспаз 8 и 10 происходит после их ассоциации с доменом DED (death effector domain) молекулы FADD (Fas-associated death domain). Прокаспаза 9 активируется через образование комплекса с адапторной молекулой APAF-1, цитохромом с и дАТФ. Эффекторные каспазы расщепляют различные внутриклеточные мишени: структурные белки, сигнальные белки, регуляторы транскрипции, белки, регулирующие метаболизм ДНК, гистоны и другие белки с

различными функциями. Среди гистонов чувствителен к действия эффекторных каспаз является гистона Н1. Расщепления этого гистона делает определенные участки ДНК доступными для действия эндонуклеаз. Каспаз также расщепляют ингибитор каспазоактивованои ДНКазы, что вызывает активацию этого фермента и расщепление ДНК на олигонуклеосомни фрагменты. Существует много путей индуцирования апоптоза, которые можно сгруппировать в три категории: от рецепторов, от митохондрий и от ядра. Первый путь активации апоптоза начинается после перекрестного связывания рецепторов ФНО-семьи (рецепторов «смерти») соответствующими лигандами. Такие рецепторы тримеризуються, вследствие чего на них появляются сайты связывания для адапторной белков семьи FADD (рис. 78).

С эффекторными доменами «смерти» DED молекулы F ADD напрямую ассоциируется прокаспаза 8. Олигомеризация прокаспаз 8 приводит к тому, что они расщепляют друг друга и таким образом самоактиву дерутся.

Каспаза 8 активирует другие каспазы - 3, 4, 6, 7 и 13. Каспаза 3, в свою очередь, активирует каспазы 6 и 9. Каспазы 3 и 6 принимают непосредственное участие в ядерном апоптозе. Предполагают, что каспаза 4 активирует митохондрии, что приводит к выходу из них в цитоплазму цитохрома с. Второй путь активации апоптоза связан с нарушением функций мембран митохондрий, в результате чего цитохром с может выходить в цитозоль и вместе с другими факторами активировать прокаспазы. Цитохром с связывается с адапторной молекулой APAF-1. При наличии дезоксиаденозинтрифосфату (дАТФ) происходит взаимодействие комплекса с каспазы 9 и активация последней. Ингибирование апоптоза на этом уровне может происходить при участии белка Все-Xl, который присоединяется к комплексу APAF-1 и каспазы 9 и блокирует его. Некоторые протеинкиназы, например протеинкиназа В (Akt), могут тормозить развитие апоптоза путем фосфорилирования определенных каспаз.

Выход цитохрома с с митохондnий контролируют некоторые белки семьи Все, встроенные в мембрану митохондрий (будут рассмотрены далее).

Третий путь активации апоптоза связан с экспрессией определенных проапоптичних генов. Главным транскрипционных факторов, определяющим экспрессию этих генов, является белок р53 - продукт гена р53 супрессора опухолей. Активация р53 пов2язана с различными метаболическими нарушениями в цитоплазме клетки, повышением уровня ионов Са +, появлением коротких фрагментов ДНК и т.д.. Активация р53 наблюдается также в случае нарушений клеточного цикла. Под действием р53 увеличивается экспрессия более 20 генов, в том числе белка Вах, рецептора Fas и др.. Итак, путь запуска апоптоза от ядра тесно связан с другими путями его индуцирования.

Кроме рассмотренных путей активации апоптоза существует еще путь непосредственной активации прокаспаз в цитозоле с помощью других протеолитических ферментов - гранзимив и гранулизину, которые доставляет в клетку-мишень активирован ЦТЛ или натуральный киллер. Этот путь подробно рассмотрен в разд. 11.

Противоречивые данные получены о том, что в некоторых типах клеток апоптоз может происходить без участия инициаторных или эффекторных каспаз. Такой тип гибели клеток называют каспазонезалежним (caspase independent form of cell death).

По способности проводить апоптичнои сигнал клетки можно разделить на два типа. Апоптоз в клетках первого типа происходит независимо от митохондрий и не блокируется гиперэкспрессией белка все-2. Апоптоз в клетках второго типа зависит от активации митохондрий. Гиперэкспрессия белков все-2 и Все-Xl в таких клетках полностью блокирует развитие апоптоза. Т-клетки относятся к клеткам первого типа, а В-лимфоциты - в клетки второго типа.

Определение апоптоза. Апоптоз – феномен наследственно запрограммированной смерти клеток. Каждая клетка при своем рождении как бы запрограммирована на самоуничтожение. Условие ее жизни – блокирование этой суицидальной программы.

Апоптоз реализуется для клеток:

Старых, отживших свой срок;

Клеток с нарушениями дифференцировки;

Клеток с нарушениями генетического аппарата;

Клеток, пораженных вирусами.

Морфологические признаки апоптоза.

Сморщивание клетки;

Конденсация и фрагментация ядра;

Разрушение цитоскелета;

Буллезное выпячивание клеточной мембраны.

Особенность апоптоза – апоптоз не вызывает воспаления в окружающих тканях.Причина - сохранность мембраны и → изоляция повреждающих факторов цитоплазмы до полного завершения процесса (О 2 - , Н 2 О 2 , лизосомальные ферменты). Эта особенность – важная позитивная черта апоптоза, в отличие от некроза. При некрозе мембрана повреждается (или разрывается) сразу же. Поэтому при некрозе содержимое цитоплазмы высвобождается (О 2 - , Н 2 О 2 , лизосомальные ферменты). Возникает повреждение соседних клеток и воспалительный процесс. Важная черта апоптоза - удаление умирающих клеток происходит без развития воспаления.

Процесс апоптоза - может быть разделен на 2 (две) фазы:

1. Формирование и проведение апоптических сигналов – фаза принятия решения.

2. Демонтаж клеточных структур – эффекторная фаза.

1-я фаза – принятия решения (=формирование и принятие апоптических сигналов). Это фаза принятия стимулов для апоптоза. В зависимости от характера стимулов, может быть 2 (два) типа сигнальных путей:

1) повреждение ДНК в результате радиации, действия токсических агентов, глюкокортикоидов и т.д.

2) активация рецепторов «региона клеточной смерти» . Рецепторы «региона клеточной смерти» - это группа рецепторов на мембранах любых клеток, которые воспринимают проапоптические стимулы. Если количество и активность таких рецепторов увеличивается, то увеличивается количество апоптически гибнущих клеток. К рецепторам «региона клеточной смерти» относятся: а) TNF-R (связывается с фактором некроза опухолей и активирует апоптоз); б) Fas-R (к); в) CD45-R (связывается с антителами и активирует апоптоз).

В зависимости от типа сигнала, существует 2 (два) основных способа апоптоза: а) в результате повреждения ДНК;

б) в результате самостоятельной активации рецепторов «региона клеточной смерти» без повреждения ДНК.

2-я фаза – эффекторная (=демонтаж клеточных структур. Основные фигуранты эффекторной фазы:

Цистеиновые протеазы (каспазы);

Эндонуклеазы;

Сериновые и лизосомальные протеазы;

Протеазы, активированные Ca ++ (кальпейн)

Но! Среди них основные эффекторы демонтажа клеточных структур – каспазы.

Классификация каспаз - 3 (три) группы:

Эффекторные каспазы - каспазы 3, 6, 7.

Индукторы активации эффекторных каспаз – каспазы 2, 8, 9, 10. = активаторы цитокинов – каспазы 1, 4, 5, 13.

Эффекторные каспазы – каспазы 3, 6, 7. Это непосредственные исполнители апоптоза. Эти каспазы находятся в клетке в неактивном состоянии. Активированные эффекторные каспазы начинают цепь протеолитических событий, целью которых является «демонтаж» клетки. Их активируют индукторы активации эффекторных каспаз.

Индукторы активации эффекторных каспаз – каспазы 2, 8, 9, 10. Основные индукторы – каспазы 8 и 9 . Они активируют эффекторные каспазы. Механизм – расщепление аспарагиновых оснований с последующей димеризацией активных субъединиц. Эти каспазы при обычном состоянии в клетках неактивны, существуют в форме прокаспаз.

Активация тех или иных индукторов зависит от типа сигнального пути:

1. При повреждении ДНК задействован сигнальный путь № 1, активируется каспаза № 9.

2. При активации рецепторов клеточной смерти задействован сигнальный путь № 2, активируется каспаза № 8.

Сигнальный путь № 1 (связан с повреждением ДНК)

Повреждение ДНК

Активация гена р53 и продукция соответствующего белка

Активация проапоптических генов семейства BCL-2 (BAX и BID)

Образование белков этих генов

Активация каспазы 9

Активация каспазы 3

Сигнальный путь № 2

(связан с активацией «региона клеточной смерти»)

Лиганд + рецепторы «региона клеточной смерти»

Активация каспазы № 8

Независимая активация каспазы № 3

Активация других каспаз и протеаз

Регуляция апоптоза. Исследования последних лет привели к созданию модели апоптоза. По этой модели каждая клетка при своем рождении запрограммирована на самоуничтожение. Следовательно, условием ее жизни является блокирование этой суицидальной программы. Основная задача регуляции апоптоза – держать эффекторные каспазы в неактивном состоянии, но быстро переводить их в активную форму в ответ на минимальное действие соответствующих индукторов.

Отсюда, понятие ингибиторов и активаторов апоптоза.

Ингибиторы апоптоза (=антиапоптические факторы). К наиболее серьезным ингибиторам апоптоза относятся ростовые факторы. Другие: нейтральные аминокислоты, цинк, эстрогены, андрогены, некоторые белки.

Пример: Белки семейства IAP – подавляют активность каспаз 3 и 9. Запомнить: один из этих белков (Survin) обнаружен в опухолевых клетках. С ним связывают резистентность опухолевых клеток к химиотерапии

Активаторы апоптоза (=проапоптические факторы). Это проапоптические гены и их продукция: а) гены семейства BCL-2 (BAX и BID); б) гены Rb и P53 (запускают апоптоз, если клетка задержана механизмом checkpoint.

Резюме. Патогенез многих заболеваний, в том числе и опухолевых, связан со снижением способности клеток подвергаться апоптозу. Отсюда накопление поврежденных клеток и формирование опухоли.

ПАТОФИЗИОЛОГИЯ КЛЕТОЧНОГО ДЕЛЕНИЯ

Основное отличие деления здоровой и опухолевой клетки:

Деление здоровой клетки регулируется паракринным и эндокринным способом. Клетка подчиняется этим сигналам и делится только в том случае, если организм нуждается в образовании новых клеток данного вида.

Деление опухолевой клетки регулируется аутокринным способом. Опухолевая клетка сама образует митогенные стимуляторы и сама же делится под их влиянием. Она не отвечает на паракринные и эндокринные стимулы.

Существует 2(два) механизма опухолевой трансформации клеток:

1. Активация онкогенов.

2. Инактивация генов-супрессоров.

АКТИВАЦИЯ ОНКОГЕНОВ

Прежде всего 2 (два) главных понятия: = протоонкогены;

Онкогены.

Протоонкогены – это нормальные, неповрежденные гены, которые контролируют деление здоровой клетки.

К протоонкогенам относятся гены, контролирующие образование и работу:

1. Ростовых факторов.

2. Мембранных рецепторов к ростовым факторам, например тирозинкиназных рецепторов.

3. Ras-белков.

4. MAP-киназ, участниц МАР-киназного каскада.

5. Транскрипционных факторов AP-1.

Онкогены – поврежденные протоонкогены. Процесс повреждения протоонкогена и трансформация его в онкоген называется активация онкогена.

Механизмы активации онкогена.

1. Включение (вставка) промотора. Промотор – это участок ДНК, с которым связывается РНК-полимераза протоонкогена. Необходимое условие – промотор должен находится в непосредственной близости с протоонкогеном. Отсюда варианты: а) промотор - ДНК-копия онкорнавирусов; б) «прыгающие гены» - участки ДНК, способные перемещаться и встраиваться в разные участки генома клетки.

2. Амплификация – увеличение числа протоонкогенов или появление копий протоонкогенов. Протоонкогены в норме обладают небольшой активностью. При увеличении числа или появлении копий их общая активность значительно возрастает и это может привести к опухолевой трансформации клетки.

3. Транслокация протоонкогенов. Это перемещение протоонкогена в локус с функционирующим промотором.

4. Мутации протоонкогенов.

Продукция онкогенов. Онкогены образуют свои белки. Эти белки называются «онкобелки».

Синтез онкобелков называется «экспрессия активных клеточных онкогенов».

Онкобелки – в основе своей есть аналоги белков протоонкогенов: ростовых факторов, Ras-белков, МАР-киназ, транскрипционных факторов. Но есть количественные и качественные отличия онкогенов от белков протоонкогенов.

Отличия онкобелков от нормальной продукции протоонкогенов:

1. Увеличение синтеза онкобелков по сравнению с синтезом белков протоонкогенов.

2. Онкобелки имеют структурные отличия от белков протоонкогенов.

Механизм действия онкобелков.

1. Онкобелки соединяются с рецепторами для факторов роста и образуют комплексы, постоянно генерирующие сигналы к делению клетки.

2. Онкобелки повышают чувствительность рецепторов к факторам роста или понижают чувствительность к ингибиторам роста.

3. Онкобелки могут сами действовать как факторы роста.

ИНАКТИВАЦИЯ ГЕНОВ-СУПРЕССОРОВ

Гены-супрессоры: Rb и р53.

Их продукция – соответствующие белки.

Инактивация генов-супрессоров (наследственное или приобретенное) ведет к пропуску в митоз клеток с поврежденной ДНК, размножению и накоплению этих клеток. Это – возможная причина формирования опухоли.

ОПУХОЛЕВЫЙ РОСТ: ОПРЕДЕЛЕНИЕ, ПРИЧИНЫ УВЕЛИЧЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Опухоль – патологическое разрастание, отличающееся от других патологических разрастаний наследственно закрепленной способностью к неограниченному неконтролируемому росту.

Другие патологические разрастания – гиперплазия, гипертрофия, регенерация после повреждения.

Причины увеличения количества злокачественных заболеваний среди населения:

1. Увеличение продолжительности жизни.

2. Улучшение качества диагностики → увеличение выявляемости онкологических заболеваний.

3. Ухудшение экологической обстановки, увеличение содержания канцерогенных факторов в окружающей среде.

ДОБРОКАЧЕСТВЕННЫЕ И ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ ОПУХОЛИ

Единой классификации опухолей до сих пор не создано. Причина:

1. Большое разнообразие признаков, характерных для различных опухолей.

2. Недостаточность знания их этиологии и патогенеза.

В основе современных классификаций - главные морфологические и клинические признаки опухолей.

На основе клинической характеристики все опухоли делят на доброкачественные и злокачественные.

Доброкачественные опухоли:

1. Клетки опухоли морфологически идентичны или похожи на нормальные клетки-предшественники.

2. Степень дифференцировки опухолевых клеток – достаточно высокая.

3. Скорость роста – медленная, в течение многих лет.

4. Характер роста – экспансивный, т.е. во время роста опухоли соседние ткани раздвигаются, иногда сдавливаются, но обычно не повреждаются.

5. Отграниченность от окружающих тканей – четкая.

6. Способность к метастазированию – отсутствует.

7. Отсутствие выраженного неблагоприятного воздействия на организм. Исключение: опухоли, расположенные вблизи жизненно важных центров. Пример: опухоль головного мозга, сдавливающая нервные центры.

Злокачественные опухоли.

1. Клетки опухоли морфологически отличаются от нормальной клетки-предшественницы (часто до неузнаваемости).

2. Степень дифференцировки опухолевых клеток – низкая.

3. Скорость роста – быстрая.

4. Характер роста – инвазивный, т.е. опухоль прорастает в соседние структуры. Способствующие факторы:

Приобретение опухолевыми клетками способности отшнуровываться от опухолевого узла и активно перемещаться;

Способность опухолевых клеток продуцировать «канцероагрессины». Это белки, которые проникают в окружающие нормальные ткани и стимулируют хемотаксис для опухолевых клеток.

Уменьшение сил клеточной адгезии. Это облегчает отшнуровку опухолевых клеток от первичного узла и их последующее движение.

Уменьшение контактного торможения.

5. Отграниченность от окружающих тканей – нет.

6. Способность к метастазированию – выражена.

7. Воздействие на организм – неблагоприятное, генерализованное.